Продукти

Мембранната топология на домейна на канала на колицин Е1 е изследвана чрез флуоресцентен резонансен трансфер на енергия (FRET).FRET включва генетично кодирана флуоресцентна аминокиселина (кумарин) като донор и селективно маркиран цистеинов остатък, свързан с DABMI (4-(диметиламино)фенилазофенил-4'-малеимид) като акцептор на FRET.Флуоресцентният кумаринов остатък беше включен в протеина чрез ортогонална тРНК/аминоацил-тРНК синтетазна двойка, която позволи селективно включване във всяко място в домейна на колициновия канал.Всеки вариант съдържа стоп (TAG) мутация за включване на кумарин и цистеинова (TGT) мутация за DABMI прикрепване.Шест междуспирални разстояния в спирали 1-6 бяха определени с помощта на FRET анализ както за разтворимите, така и за свързаните с мембраната състояния.Данните от FRET показват големи промени в междуспиралните разстояния между спиралите 3-6 при асоцииране на мембраната, осигурявайки нов поглед върху свързаната с мембраната структура на домейна на канала.Като цяло, междуспиралните ефективности на кумарин-DABMI FRET намаляват при мембранно свързване, надграждайки модела на чадъра за колициновия канал.Разработен е предварителен модел за затворено състояние на домейна на канала въз основа на текущи и публикувани преди това FRET данни.Моделът предполага кръгово подреждане на спирали 1-7 по посока на часовниковата стрелка от извънклетъчната страна и мембранно междинно свързване на спирали 1, 6, 7 и 10 около централната трансмембранна фибичка, образувана от спирали 8 и 9.