Продукти

Подобно на други РНК вируси с положителна верига, томбусвирусите се репликират от мембранно-свързания вирусен репликазен комплекс (VRC).VRC се състои от p92 вирус-кодирана РНК-зависима РНК полимераза (RdRp), вирусен р33 РНК шаперон и няколко кооптирани гостоприемникови протеини.За да се превърне във функционален RdRp след неговата транслация, p92 репликационният протеин трябва да бъде включен във VRC, последвано от неговото активиране.По-рано показахме в безклетъчен тест, базиран на екстракт от дрожди, че активирането на вируса RdRp на Tomato bushy stunt virus (TBSV) изисква разтворим фактор(и) гостоприемник.В тази статия ние идентифицираме клетъчния протеин на топлинен шок 70 (Hsp70) като кооптиран фактор гостоприемник, необходим за активирането на N-терминално съкратен рекомбинантен TBSV RdRp.В допълнение, базираното на малки молекули блокиране на функцията на Hsp70 инхибира синтеза на РНК от томбусвируса RdRp in vitro.Освен това, ние показваме, че неутралните фосфолипиди, а именно фосфатидилетаноламин (PE) и фосфатидилхолин (PC), повишават RdRp активирането in vitro.Обратно, фосфатидилглицеролът (PG) показва силен и доминиращ инхибиторен ефект върху in vitro RdRp активирането.Ние също така демонстрираме, че PE и PC стимулират взаимодействието RdRp-вирусна плюс-верига РНК [(+)РНК], докато PG инхибира свързването на вирусната РНК към RdRp.Въз основа на стимулиращите спрямо инхибиторните роли на различни фосфолипиди в активирането на RdRp на томбусвирус, ние предлагаме липидният състав на целевите субклетъчни мембрани да се използва от томбусвирусите за регулиране на сглобяването на нов VRC по време на инфекцията. Кодираната от вируса РНК-зависима РНК полимераза (RdRp), който е отговорен за синтезирането на вирусното РНК потомство в заразени клетки на няколко РНК вируси с положителна верига, първоначално е неактивен.Тази стратегия вероятно ще избегне синтеза на вирусна РНК в цитозола, което бързо би довело до индуциране на РНК-задействани клетъчни антивирусни отговори.По време на сглобяването на мембранно-свързания репликазен комплекс, вирусният RdRp се активира чрез ненапълно разбран процес, който прави RdRp способен да синтезира РНК.Използвайки TBSV RdRp, ние показваме, че кооптираният клетъчен Hsp70 шаперон и неутралните фосфолипиди улесняват активирането на RdRp in vitro.Обратно, фосфатидилглицеролът (PG) има доминиращ инхибиторен ефект върху in vitro активирането на RdRp и взаимодействието RdRp-вирусна РНК, което предполага, че мембранният микродомен, заобикалящ RdRp, значително влияе върху неговата способност за синтез на РНК.По този начин, активирането на вирусния RdRp вероятно зависи от множество компоненти на гостоприемника в заразените клетки.