Продукти

Диференцирането на орбиталните фибробласти в зрели адипоцити и последващото натрупване на мастна тъкан е показано при прогресирането на орбитопатия на Graves (GO).Автофагията участва в адипогенезата, но малко се знае за ролята на автофагията в инициирането и прогресирането на GO.Целта на това проучване е да се изследва ролята на аутофагията в патогенезата на GO. Бяха анализирани експланти на орбитална мастна/съединителна тъкан от пациенти с GO и от нормални субекти, както и изолирани орбитални фибробласти.Адипогенезата се индуцира с помощта на диференцираща среда с или без водороден пероксид и аутофагията се манипулира с помощта на бафиломицин А1 и Atg5-насочена къса фиби РНК (shRNA).Автофагозомите са идентифицирани чрез електронна микроскопия.Експресията на свързаните с аутофагията гени и свързаните с адипогенезата транскрипционни фактори бяха анализирани чрез полимеразна верижна реакция на обратна транскрипция в реално време и/или Western blot анализ.Натрупването на липидни капчици се изследва чрез оцветяване с Oil Red O. Автофагичните вакуоли са по-изобилни в GO клетки, отколкото в не-GO клетки (р<0,05).Експресията на гени, свързани с автофагия, е значително по-висока в GO тъкани и клетки, отколкото в техните не-GO аналози, съответно.Интерлевкин-1β повишава LC3-II, p62 и Atg7 протеин в GO клетки.Натрупването на автофагозома е показано на ден 4 от адипогенезата и намалява до ден 10, заедно с образуването на липидни капчици.Експресията на LC3 и p62 протеини се повишава в рамките на 48 часа от диференциацията и намалява постепенно от ден 4 до 10. Лечението с бафиломицин А1 и нокдаунът на Atg5 от shRNA инхибират натрупването на липидни капчици и потискат експресията на адипогенни маркери. Автофагията се увеличава в GO тъкан и клетки в сравнение с не-GO тъкан и клетки, което предполага, че аутофагията играе роля в патогенезата на GO.Манипулацията с автофагия може да бъде терапевтична цел за GO.