Продукти

Окислителното увреждане на ДНК базите обикновено води до образуването на окислени пурини, особено 7,8-дихидро-8-оксогуанин (8-oxoG) и 7,8-дихидро-8-оксоаденин (8-oxoA), като първият е добре известна мутагенна лезия.Тъй като 8-oxoG лесно се подлага на по-нататъшно окисляване в сравнение с нормалните бази, вмъкването на база по време на синтеза на ДНК срещу окислена форма на 8-oxoG беше изследвано in vitro.Синтетичен шаблон, съдържащ единична 8-oxoG лезия, първо се третира с различни едноелектронни окислители или при условия на синглетен кислород и след това се подлага на удължаване на праймера, катализирано от екзо- (Kf exo-), ДНК полимераза алфа на телешки тимус (pol alpha ) или човешка ДНК полимераза бета (pol бета).В съответствие с предишни доклади, dAMP и dCMP се вмъкват селективно срещу 8-oxoG с всичките три ДНК полимерази.Интересно е, че е установено, че окисляването на 8-oxoG индуцира dAMP и dGMP вмъкване срещу лезията от Kf exo- с преходно инхибиране на удължаване на праймера o, възникващо на мястото на модифицираната база.Освен това лезията представлява блок по време на синтеза на ДНК от pol alpha и pol beta.Експерименти с 8-оксоА-модифициран шаблонен олигонуклеотид показват, че както 8-оксоА, така и окислена форма на 8-оксоА директно вмъкват dTMP от Kf exo-.Масспектрометричният анализ на 8-oxoG-съдържащи олигонуклеотиди преди и след окисление с IrCl62-съвпада с окисляването предимно на мястото на 8-oxoG, което води до образуване на гуанидинохидантоинова част като основен продукт.Не са получени доказателства за образуване на абазични места.Тези резултати показват, че окислена форма на 8-oxoG, вероятно гуанидинохидантоин, може да насочи неправилно разчитане и неправилно вмъкване на dNTP по време на синтеза на ДНК.Ако такъв процес се случи in vivo, той би представлявал точкова мутагенна лезия, водеща до трансверсии G-->T и G-->C.Въпреки това, съответната окислена форма на 8-оксоА показва предимно правилно вмъкване на Т по време на синтеза на ДНК с Kf екзо-.