Продукти

Бета-D-2'-деокси-2'-флуоро-2'-C-метилцитидин (PSI-6130) е мощен специфичен инхибитор на синтеза на РНК на вируса на хепатит С (HCV) в Huh-7 репликон клетки.За да инхибира HCV NS5B РНК полимераза, PSI-6130 трябва да бъде фосфорилиран до 5'-трифосфатна форма.Изследвани са фосфорилирането на PSI-6130 и инхибирането на HCV NS5B.Фосфорилирането на PSI-6130 чрез рекомбинантна човешка 2'-деоксицитидин киназа (dCK) и уридин-цитидин киназа 1 (UCK-1) се измерва чрез използване на свързана спектрофотометрична реакция.Показано е, че PSI-6130 е субстрат за пречистен dCK, с Km от 81 микроМ и kcat от 0,007 s-1, но не е субстрат за UCK-1.PSI-6130 монофосфат (PSI-6130-MP) е ефективно фосфорилиран до дифосфат и впоследствие до трифосфат чрез рекомбинантна човешка UMP-CMP киназа и съответно нуклеозид дифосфат киназа.Изследвано е инхибирането на див тип и мутирани (S282T) HCV NS5B РНК полимерази.Константата на инхибиране в стационарно състояние (Ki) за PSI-61 30 трифосфат (PSI-6130-TP) с ензима от див тип е 4,3 микроМ.Подобни резултати са получени с 2'-С-метиладенозин трифосфат (Ki=1.5 микроМ) и 2'-С-метилцитидин трифосфат (Ki=1.6 микроМ).NS5B с мутация S282T, за която е известно, че придава резистентност към 2'-C-метиладенозин, беше инхибиран от PSI-6130-TP толкова ефикасно, колкото дивия тип.Включването на PSI-6130-MP в РНК, катализирано от пречистена NS5B РНК полимераза, доведе до прекъсване на веригата.