Продукти

Еукариотните клетки съдържат деликатен баланс от малки количества от четирите дезоксирибонуклеозид трифосфати (dNTP), достатъчни само за няколко минути репликация на ДНК.Както дефицитът, така и излишъкът на единичен dNTP може да доведе до повишени нива на мутация, неправилно възстановяване на ДНК или изчерпване на митохондриална ДНК.dNTP обикновено се определят количествено чрез ензимен анализ, при който включването на радиоактивен dATP (или радиоактивен dTTP в анализа за dATP) в специфични синтетични олигонуклеотиди от ДНК полимераза е пропорционално на концентрацията на неизвестния dNTP.Откриваме, че често използваната ДНК полимераза Klenow може да замести съответния рибонуклеотид за неизвестния dNTP, което в някои случаи води до голямо надценяване на dNTP.Сега описваме условията за анализ за всеки dNTP, които избягват включването на рибонуклеотид.За анализите на dTTP и dATP е достатъчно да се сведат до минимум концентрациите на ензима Klenow и на белязания dATP (или dTTP);за dCTP и dGTP трябваше да заменим ензима Klenow или с Taq ДНК полимераза, или с Thermo Sequenase.Предполагаме, че в някои по-ранни доклади включването на рибонуклеотид може да е причинило твърде високи стойности за dGTP и dCTP.