Продукти

Подобреното използване на азот при говедата е важно, за да се осигури устойчиво производство на говеда.Тъй като пурините и пиримидините (PP) представляват значителна част от азота в търбуха, по-доброто разбиране на абсорбцията и междинния метаболизъм на PP е от съществено значение.Настоящата работа описва разработването и валидирането на чувствителен и специфичен метод за едновременно определяне на 20 пурини (аденин, гуанин, гуанозин, инозин, 2'-деоксигуанозин, 2'-деоксиинозин, ксантин, хипоксантин), пиримидини (цитозин, тимин, урацил, цитидин, уридин, тимидин, 2'-дезоксиуридин) и техните продукти на разграждане (пикочна киселина, алантоин, β-аланин, β-уреидопропионова киселина, β-аминоизомаслена киселина) в кръвната плазма на млечни крави.Техниката, базирана на високоефективна течна хроматография, съчетана с електроспрей йонизираща тандемна масова спектрометрия (LC-MS/MS) беше комбинирана с индивидуални съвпадащи с матрицата стандарти за калибриране и стабилни изотопно маркирани референтни съединения.Количественият анализ беше предшестван от нова процедура за предварителна обработка, състояща се от утаяване с етанол, филтриране, изпаряване и възстановяване.Изследвани са параметрите за разделяне и откриване по време на LC-MS/MS анализа.Беше потвърдено, че използването на модел на логаритмично калибриране, а не модел на линейно калибриране, води до по-нисък CV% и липсата на тест за прилягане демонстрира задоволителна линейна регресия.Методът обхваща диапазони на концентрация за всеки метаболит според тези в реални проби, например гуанин: 0,10-5,0 μmol/L и алантоин: 120-500 μmol/L.CV% за избраните диапазони на количествено определяне са под 25%.Методът има добра повторяемост (CV%≤25%) и междинна прецизност (CV%≤25%) и отлично възстановяване (91-107%).Всички метаболити демонстрират добра дългосрочна стабилност и добра стабилност в рамките на цикъла (CV%≤10%).Различни степени на абсолютни матрични ефекти са наблюдавани в плазмата, урината и млякото.Определянето на относителните матрични ефекти разкри, че методът е подходящ за почти всички изследвани метаболити на РР в плазма, взета от артерия и портална чернодробна, чернодробна и гастроспленична вена и, с няколко изключения, също и за други видове като пиле, прасе, норка, човек и плъх.