Продукти

Патогенните молекулярни пътища при циротични чернодробни заболявания като вирус на хепатит С (HCV), автоимунен хепатит (AIH) и първична билиарна цироза (PBC) са слабо характеризирани.Диференциално експресираните гени често са важни в патогенезата на заболяването.Супресионната субтрактивна хибридизация (SSH) е подход за целия геном, който обогатява за диференциално експресирани транскрипти на иРНК.Имахме за цел да направим нови наблюдения на диференциална генна експресия при цироза, използвайки SSH, комбиниран с количествена полимеразна верижна реакция на обратна транскриптаза в реално време (RT-PCR).Чернодробните транскриптоми при HCV цироза, AIH цироза, PBC и чернодробна тъкан без заболяване са изследвани чрез SSH.Получените комплементарни ДНК (сДНК) клонинги бяха повторно скринирани за диференциална експресия чрез дот-блот хибридизация и след това секвенирани.Избраната генна експресия се определя количествено чрез RT-PCR в реално време.След SSH, 694 клона бяха повторно скринирани за диференциална генна експресия, от които 145 бяха секвенирани и беше установено, че произлизат от 89 различни гени.Седем клонинга бяха хомоложни само с експресирани секвенционни маркери (EST) последователности, кодиращи гени, които нямат известна функция.Повишено регулиране на експресията на четири гена беше потвърдено чрез RT-PCR в реално време: трансмембранен 4 суперсемейство член 3 (тетраспанин CO-029) при всички форми на цироза, хеджхог взаимодействащ протеин (HIP) при AIH цироза и хитиназа 3-like-1 (HC gp-39 или ykl-40) и повторение на аргинин-глутаминова киселина (RERE) при HCV цироза.Полиморфизми на RERE ген и варианти на снаждане са наблюдавани във всички изследвани тъкани.Повишената регулация на тетраспанин CO-029 е локализирана предимно в жлъчните дуктуларни клетки.В заключение, нови наблюдения на диференциална генна експресия при човешка цироза са направени с помощта на SSH като основен инструмент за откриване.По-специално, необходими са по-нататъшни изследвания на гена RERE и неговите продукти при чернодробно заболяване, свързано с HCV.