Продукти

Моногалактопиранозиди на флуоресцеин и флуоресцеин метилов естер: синтез, ензимна хидролиза чрез биотнилирана β-галактозидаза и определяне на коефициента на транслационна дифузия

Флуоресцеиновите моногликозиди (d-галактопиранозид (FMG) и d-глюкопиранозид) и техният метилов естер (MFMG) са получени от ацетобромоглюкоза/галактоза и флуоресцеин метилов естер с добри добиви.Проведени са експерименти за ензимна хидролиза (с помощта на биотинилирана β-галактозидаза) на галакто производните и са изчислени кинетичните параметри.По време на хидролизата се наблюдава 15-20 пъти увеличение на интензитета на флуоресценцията.Забелязано е линейно увеличение на флуоресценцията при кратко време и ниска концентрация на субстрат, което прави тези съединения полезни и чувствителни сонди за галактозидази.Големината на стойността на константата на Михаелис-Ментен (Km) за MFMG е по-висока от тази на FMG, което предполага възможна конформационна промяна на флуорогенния субстрат.Стойността на Km за биотинилиран β-Gal с FMG е по-ниска от тази за естествения ензим.Това наблюдение показва по-висок субстратен афинитет на биотинилирания ензим в сравнение с естествения ензим.Коефициентите на транслационна дифузия са измерени както за флуорогенните субстрати, така и за двата продукта, като се използва флуоресцентна корелационна спектроскопия.Коефициентите на транслационна дифузия за флуорогенни субстрати и продуктите на ензимната хидролиза са измерени като сходни, в диапазона от 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.По този начин усилване или забавяне на ензимната кинетика поради разлика в транслационната мобилност на субстрата и продукта не е толкова очевидно.