Продукти

X-gal (наричано също съкратено BCIG за 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-β-D-галактопиранозид) е органично съединение, състоящо се от галактоза, свързана със заместен индол.Съединението е синтезирано от Jerome Horwitz и сътрудници през 1964 г. Официалното химическо наименование често се съкращава до по-малко точни, но и по-малко тромави фрази като бромохлороиндоксил галактозид.X от индоксил може да бъде източникът на X в X-gal контракцията.X-gal често се използва в молекулярната биология за тестване за наличието на ензим, β-галактозидаза, на мястото на обичайната му мишена, β-галактозид.Използва се и за откриване на активността на този ензим в хистохимията и бактериологията.X-gal е един от многото индоксил гликозиди и естери, които дават неразтворими сини съединения, подобни на багрилото индиго, в резултат на ензимно катализирана хидролиза.

X-gal е аналог на лактозата и следователно може да бъде хидролизиран от ензима β-галактозидаза, който разцепва β-гликозидната връзка в D-лактозата.X-gal, когато се разцепва от β-галактозидаза, дава галактоза и 5-бромо-4-хлоро-3-хидроксииндол - 1. Последният след това спонтанно димеризира и се окислява до 5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро -индиго - 2, интензивно син продукт, който е неразтворим.Самият X-gal е безцветен, така че наличието на синьо оцветен продукт може следователно да се използва като тест за наличието на активна β-галактозидаза.Това също позволява бактериалната β-галактозидаза (така наречената lacZ) да се използва като репортер в различни приложения.

При двухибриден анализ β-галактозидазата може да се използва като репортер за идентифициране на протеини, които взаимодействат един с друг.При този метод геномните библиотеки могат да бъдат скринирани за протеиново взаимодействие с помощта на дрожди или бактериална система.Когато има успешно взаимодействие между скринираните протеини, то ще доведе до свързване на активиращ домейн към промотор.Ако промоторът е свързан с lacZ ген, производството на β-галактозидаза, което води до образуването на синьо-пигментирани колонии в присъствието на X-gal, следователно ще покаже успешно взаимодействие между протеините.Тази техника може да бъде ограничена до скрининг на библиотеки с размер по-малък от около 106. Успешното разцепване на X-gal също създава забележимо неприятна миризма поради изпаряването на индола.

Тъй като самият X-gal е безцветен, наличието на синьо оцветен продукт може да се използва като тест за наличието на активна β-галактозидаза.

Тази лесна идентификация на активен ензим позволява генът за β-галактозидаза (генът lacZ) да бъде използван като репортерен ген в различни приложения.