Продукти

Протеиновото фосфорилиране регулира различни клетъчни функции и играе ключова роля в ранното развитие на растенията.За да допълним и разширим предишни изследвания на протеиново фосфорилиране в разсад на Arabidopsis, ние използвахме алтернативен подход, който комбинира протеинова екстракция при неденатуриращи условия с обогатяване с афинитетна хроматография с имобилизиран метален йон (IMAC) на непокътнати фосфопротеини в екстракти, изчерпани с Rubisco, последвано от идентификация използвайки двуизмерна гел електрофореза (2-DE) и течна хроматография-тандемна мас спектрометрия (LC-MS/MS).Смилането на трипсин в гел и анализът на избрани гел петна идентифицира 144 фосфорилирани пептиди и остатъци, от които само 18 фосфопептиди и 8 фосфозита бяха открити в базите данни на PhosPhAt 4.0 и P3DB Arabidopsis thaliana сайтове за фосфорилиране.Повече от половината от 82-те идентифицирани фосфопротеини са участвали във въглехидратния метаболизъм, фотосинтезата/дишането или механизмите за реакция на оксидативен стрес.Обогатяването на непокътнати фосфопротеини преди 2-DE и LC-MS/MS изглежда подобрява откриването на остатъци от фосфорилиран треонин и тирозин в сравнение с методи, които използват обогатяване на ниво пептид, което предполага, че двата подхода са донякъде допълващи се по отношение на покритието на мястото на фосфорилиране.Сравняването на резултатите за млади разсад с тези, получени преди това за зрели листа на Arabidopsis, идентифицира пет протеина, които са различно фосфорилирани в тези тъкани, демонстрирайки потенциала на тази техника за изследване на динамиката на протеиновото фосфорилиране по време на развитието на растенията.