Продукти

Протеинът ORF45 на асоциирания със саркома на Капоши херпесен вирус (KSHV) е гамахерпесвирус-специфичен незабавно-ранен тегументен протеин.Нашите предишни проучвания разкриха неговата решаваща роля както в ранните, така и в късните стадии на KSHV инфекцията.В това проучване изследвахме интерактома на ORF45, използвайки панел от моноклонални антитела.В допълнение към идентифицираните по-рано екстрацелуларно регулирана киназа (ERK) и p90 рибозомна S6 киназа (RSK) протеини, открихме няколко други съпречистени протеини, включително видни от ~38 kDa и ~130 kDa.Масспектрометрията разкрива, че 38-kDa протеинът е вирусен ORF33, а 130-kDa протеинът е клетъчен USP7 (убиквитин-специфична протеаза 7).Ние картографирахме ORF33-свързващия домейн към силно запазените карбоксил-терминални 19 аминокиселини (aa) на ORF45 и USP7-свързващия домейн към докладвания консенсусен мотив в централната област на ORF45.Използвайки имунофлуоресцентно оцветяване, наблюдавахме колокализация на ORF45 с ORF33 или USP7 както при йони на трансфектирани условия, така и в KSHV-инфектирани клетки.Освен това забелязахме ORF45-зависима релокализация на част от ORF33/USP7 от ядрото към цитоплазмата.Ние открихме, че ORF45 причинява увеличаване на натрупването на протеин ORF33, което е премахнато, ако ORF33- или USP7-свързващият домейн в ORF45 бъде изтрит.Освен това, делецията на консервирания карбоксилен край на ORF45 в KSHV генома драстично намалява нивото на ORF33 протеин в KSHV-инфектирани клетки и премахва производството на потомствени вириони.Взети заедно, нашите резултати не само разкриват нови компоненти на интерактома ORF45, но също така демонстрират, че взаимодействията между тези протеини са от решаващо значение за литична репликация на KSHV. Свързаният със саркома на Капоши херпесен вирус (KSHV) е причинителят на няколко човешки ракови заболявания.KSHV ORF45 е многофункционален протеин, който е необходим за литична репликация на KSHV, но точните механизми, чрез които ORF45 изпълнява критичните си функции, са неясни.Нашите предишни проучвания разкриха, че целият протеин ORF45 в клетките съществува в комплекси с високо молекулно тегло.Затова се опитахме да характеризираме интерактома на ORF45, за да предоставим представа за неговите роли по време на литична репликация.Използвайки панел от моноклонални антитела, ние изследвахме ORF45 интерактома в KSHV-инфектирани клетки.Ние идентифицирахме два нови свързващи партньора на ORF45: вирусният протеин ORF33 и клетъчната убиквитин-специфична протеаза 7 (USP7).Освен това демонстрираме, че взаимодействието между ORF45 и ORF33 е от решаващо значение за ефективното производство на KSHV вирусни частици, което предполага, че целевата намеса с това взаимодействие може да представлява нова стратегия за инхибиране на KSHV литична репликация.