Продукти

За конкретно количествено определяне на няколко метаболита на 5-флуороурацил (5-FU) и два ендогенни монофосфатни нуклеотида, ние разработихме оригинален метод, базиран на течна хроматография – тандемна масспектрометрия (LC-MS/MS).Този анализ позволи определянето на: (i) вътреклетъчното производство на 5-флуоро-2'-дезоксиуридин-5'-монофосфат (5-FdUMP) от 5-FU или 5-флуоро-2'-деоксиуридин (5-FdUrd) , (ii) въздействието на концентрацията на 5-FdUMP върху вътреклетъчното съотношение 2'-деоксиуридин-5'-монофосфат (dUMP)/тимидин-5'-монофосфат (TMP) и (iii) степента на секреция на 5-FdUMP и 5-FU от човешки култивирани клетки от ABC транспортери.При нашите експериментални условия клетките се инкубират с 5-FU или 5-FUrd.След това клетъчните протеини се утаяват с метанол.Тази процедура осигурява високо възстановяване на екстракцията.В допълнение, за измерване на секрецията на 5-FU и 5-FdUMP от клетките, ние извършихме количествено определяне на тези молекули в културална среда.Средите са или директно инжектирани (5-FU) или подложени на твърдофазова екстракция с използване на патрон за екстракция на Oasis Wax (5-FdUMP).Разделянето на аналитите се извършва на dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) колона с изократен режим, като се използва амониев формиат буфер/метанол/вода (5/5/90, v/v) като подвижна фаза.Времето на изпълнение не надвишава 6,2 минути.Аналитите се йонизират в интерфейс с електроспрей в режим на отрицателни йони.Ние валидирахме метода в диапазон от 2, 5–150 ng mL -1 според съединенията.Вариабилността в рамките на анализа и в рамките на анализа е по-ниска от 10% за седем дни.Всички съединения са стабилни в клетки или в културална среда, когато пробите се съхраняват при -20 °C за най-малко две седмици и след три цикъла на замразяване-размразяване.Не се наблюдава матричен ефект и в двете среди.