Продукти

Механизмът на Mycobacterium smegmatis G (MbsG), флавин-зависима l-лизин монооксигеназа, беше изследван при стационарни и бързи реакционни условия, като се използват първични и кинетични изотопни ефекти на разтворителя, субстратни аналози, рН и ефекти на вискозитета на разтворителя като механични проби.Резултатите предполагат, че l-лизинът се свързва преди NAD(P)H, което води до намаляване на константата на скоростта за редукция на флавин.Свързването на l-лизин няма ефект върху скоростта на окисление на флавин, което се случва в едноетапен процес без наблюдение на C4a-хидропероксифлавин междинен продукт.Подобни ефекти бяха определени с няколко субстратни аналози.Окислението на флавин е независимо от pH, докато kcat/Km и kred/KD pH профилите за NAD(P)H показват единични стойности на pKa от ~6,0, с нарастваща активност с намаляването на pH.При по-ниско pH, ензимът става по-несвързан, произвеждайки повече водороден пероксид и супероксид.Преносът на хидрид е частично ограничаващ скоростта при неутрално pH и става по-ограничаващ скоростта при ниско pH.Обратен ефект на вискозитета на разтворителя върху kcat/Km за NAD(P)H се наблюдава при неутрално рН, докато нормален ефект на вискозитета на разтворителя се наблюдава при по-ниско рН.Заедно резултатите показват уникален механизъм, при който настъпва ограничаваща скоростта и чувствителна към рН конформационна промяна в редуктивната полуреакция, която влияе върху ефективността на лизин хидроксилирането.